La presencia de la Iglesia en el territorio actual del Vicariato Apostólico de Puyo se inició a mediados del siglo XVII con la llegada de misioneros jesuitas y dominicos a esta tierra. Al crearse el Obispado de Mainas en 1802 y pasar este territorio a su jurisdicción, la presencia de los misioneros disminuyó y se interrumpió con frecuencia a lo largo del siglo XIX. En 1886 se crea la Prefectura Apostólica de Canelos y Macas, a cargo de la Provincia Dominicana de Ecuador, y comienza una nueva etapa en la evangelización de los nativos de la Región.
En 1936 nuevo Prefecto Apostólico: P. Jacinto Dávila (1936 – 1948) traslada la sede de la Prefectura de Canelos a Puyo, hecho que contribuirá decisivamente en el futuro al desarrollo de esta ciudad intermedia entre Baños y Canelos, hasta llegar a convertirse en la Provincia de Pastaza. El P. Sebastián Acosta, Prefecto Apostólico de 1948 – 1959, trajo las primeras religiosas misioneras: Dominicas de Santa Catalina de Siena de Colombia, en 1949 para la educación de las niñas y jóvenes de Puyo, y las Misioneras Lauritas, en 1959, para el internado y escuela de Canelos y la atención pastoral a los indígenas del río Bobonaza.
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